Viroses causadas por vírus do gênero Badnavirus são responsáveis por grandes prejuízos à cultura do inhame no Nordeste brasileiro. O conhecimento da variabilidade destes patógenos pode fornecer informações importantes sobre seu potencial evolutivo, permitindo a elaboração de melhores estratégias de manejo da doença. A análise de 425 amostras foliares de inhame coletadas em três estados do Nordeste brasileiro, em 2010, revelou uma alta incidência (93,3%) de badnaviroses. Para avaliar a variabilidade genética dos badnavírus infectando inhame, um fragmento de 579 nucleotídeos correspondente à região codificante da transcriptase reversa (RT)/RNaseH dos isolados amostrados foi amplificada por PCR e sequenciada. A análise filogenética das sequências de nucleotídeos revelou que os isolados dividem-se em dois grupos. Um é altamente relacionado com Dioscorea bacilliform AL virus (DBALV), enquanto o outro forma um clado altamente divergente dentro do gênero Badnavirus. Os isolados de DBALV apresentam 70-98% de identidade nucleotídica entre si e foram detectados em todas as áreas avaliadas e em D. alata e D. cayennensis, as duas espécies de inhame mais cultivadas no Nordeste. Os isolados do outro grupo compartilham 47-58% de identidade com isolados de DBALV e 78-95% entre si e foram encontrados apenas em D. alata na Paraíba.

Diseases caused by viruses of the genus Badnavirus are responsible for great losses in yam crops in northeastern Brazil. Knowledge of pathogen variability can provide important information about its evolutionary potential and may allow for development of better strategies for disease management. The analysis of 425 leaf samples of yam obtained in 2010 in three states of northeastern Brazil revealed a high incidence (93.3%) of badnaviruses. To evaluate the variability of yam-infecting badnaviruses, a 579-nucleotide fragment corresponding to the reverse transcriptase (RT)/RNaseH coding region was PCR-amplified and directly sequenced. Phylogenetic analysis of nucleotide sequences revealed that the isolates can be divided into two groups. The first group is highly related to Dioscorea bacilliform AL virus (DBALV), while the other set of sequences formed a highly divergent clade within the genus Badnavirus. The DBALV isolates have 70-98% nucleotide sequence identity with each other. DBALV was detected in all areas assessed and in the two most cultivated species of yam in the northeast (D. alata and D. cayanensis). The other group shares 47-58% nucleotide sequence identity with the DBALV isolates and 78-95% amongst themselves, and was found only in D. alata in the state of Paraíba.

Cowpea mild mottle virus (CpMMV), the causal agent of stem necrosis disease, has drawn attention of soybean producers in recent years due to yield losses in the main producing regions of Brazil. Serological methods for viral detection require the use of an antiserum of good quality to achieve specificity and sensitivity. The entire coat protein gene of a Brazilian CpMMV isolate was cloned into a bacterial expression vector and transformed into Escherichia coli BL21::DE3 for in vitro expression. The coat protein, fused to a His-tag, was purified under denaturing conditions by affinity chromatography using a Ni-NTA resin. After renaturation, the integrity and identity of the purified recombinant protein was confirmed by SDS-Page and MALDI-ToF/ToF mass spectrometer analyses. A rabbit was immunized with increasing amounts of the recombinant protein. The specificity and sensitivity of the antiserum was demonstrated by Western blot and indirect ELISA assays. The polyclonal antisera raised against recombinant coat protein proved to be a reliable tool for CpMMV detection.

Begomoviruses are whitefly-transmitted single-stranded DNA viruses of great economic importance in the tropics and subtropics. Several begomovirus species have been reported in tomatoes in Brazil, but only a few predominate in the field, for unknown reasons. In this study begomovirus-infected tomato samples were collected in Viçosa, State of Minas Gerais, in Nov/2009 and Dec/2010. Viral genomes were amplified, cloned and sequenced. A total of 36 DNA-A components were obtained. Sequence comparisons indicated the presence of a single begomovirus, Tomato severe rugose virus (ToSRV), with pairwise identities between isolates ranging from 97.3 to 100%. Subdivision tests indicated the existence of a single population. The analysis of variability descriptors indicated that the ToSRV population has a genetic variability similar to other begomovirus populations described in Brazil infecting tomato. Neutrality tests suggested the occurrence of purifying selection acting upon the population. Recombination analysis identified recombination events with begomoviruses from the weed species Sida micrantha. The wide distribution of ToSRV in the field and the detection of recombination indicate that continuous monitoring of viral populations in the field will be required to enable an efficient resistance-based control strategy for begomoviruses.

Senna macranthera é uma árvore tropical nativa do Sudeste e Nordeste brasileiro. Em julho de 2006, sintomas de manchas cloróticas nas folhas jovens e de mosaico leve nas folhas mais velhas foram observados em plantas de S. macranthera em Viçosa, Estado de Minas Gerais, Brasil. A observação de preparações "leaf-dip" em microscópio eletrônico de transmissão revelou a presença de partículas alongado-flexuosas. O RNA viral foi extraído de vírions purificados e utilizado como molde para RT-PCR e clonagem de fragmentos do genoma viral. Dois fragmentos (0,9 kb e 2,0 kb de tamanho) foram clonados. A análise da sequência do fragmento de 0,9 kb indicou que este corresponde à região codificadora da proteína NIb de um potyvírus, com 72% de identidade de nucleotídeos com o Pepper mottle virus (PepMoV) e Peru tomato mosaic virus (PTV), enquanto a análise do fragmento de 2,0 kb indicou que este corresponde à ORF que codifica a possível replicase de um vírus classificado na recém-estabelecida ordem Tymovirales, com 74% de identidade de nucleotídeos com o Garlic virus A (GarV-A). Com base na análise molecular e na gama de hospedeiros, conclui-se que os fragmentos virais clonados representam novas espécies, para as quais sugerem-se os nomes Senna virus Y (gênero Potyvirus, família Potyviridae) e Senna virus X (ordem Tymovirales, gênero não definido).

Senna macranthera is a common tropical tree native to South- and Northeastern Brazil. In July 2006, symptoms of chlorotic spots in the young leaves and mild mosaic in the old leaves were observed in S. macranthera trees at Viçosa, State of Minas Gerais, Brazil. Electron microscopy examination of leaf dip preparations from the young leaves revealed the presence of flexuous rods. Viral RNA was extracted from purified virion preparations and used as a template for the RT-PCR-based cloning of viral genomic fragments. Two fragments (0.9 kb and 2.0 kb in length) were cloned. Sequence analysis of the 0.9 kb fragment indicated that it corresponded to the NIb coding region of a potyvirus, with nucleotide (nt) identity level of 72% for Pepper mottle virus (PepMoV) and Peru tomato mosaic virus (PTV), while analysis of the 2.0 kb fragment indicated that it corresponded to the putative replicase ORF, which displayed 74% nt identity with the ORF1 (replicase) of Garlic virus A (GarV-A). Based on molecular analysis and the isolates' host range, it is concluded that the viral fragments represent new viruses, for which we propose the names Senna virus Y (genus Potyvirus, family Potyviridae) and Senna virus X (unassigned genus, order Tymovirales).

Grapevine leafroll-associated virus 3 (GLRaV-3), a principal espécie viral do complexo do enrolamento da folha da videira (Vitis spp.), causa reduções no rendimento e na qualidade da uva. O gene da proteína capsidial foi amplificado via RT-PCR a partir de RNA total, extraído de folhas de videira infectadas. O fragmento amplificado foi clonado e completamente seqüenciado. Em seguida, o fragmento foi subclonado no vetor de expressão pRSET-C. O plasmídeo recombinante foi utilizado para a expressão da proteína capsidial em Escherichia coli BL21:DE3. A proteína capsidial, ligada a uma cauda de 6-His, foi purificada por cromatografia de afinidade em coluna de Ni-NTA. A identidade da proteína purificada foi confirmada em SDS-PAGE e Western blot e, após quantificação, foi utilizada para imunizar coelhos. O anti-soro mostrou-se sensível e específico para a detecção do GLRaV-3 em extratos de videira por Western blot e DAS-ELISA, não tendo sido observadas reações inespecíficas ou heterólogas contra outros vírus sorologicamente não relacionados.

Grapevine leafroll-associated virus 3 (GLRaV-3), the main viral species of the grapevine leafroll complex, causes yield and quality reduction in grapes (Vitis spp.). The coat protein gene was RT-PCR-amplified from total RNA extracted from infected grapevine leaves and the amplified fragment was cloned and completely sequenced. The fragment was subsequently subcloned into the pRSET-C expression vector. The recombinant plasmid was used to transform Escherichia coli BL21:DE3 and express the capsid protein. The coat protein, fused to a 6 His-tag, was purified by affinity chromatography using an Ni-NTA resin. The identity of the purified protein was confirmed by SDS-PAGE and Western blot. The in vitro-expressed protein was quantified and used for rabbit immunizations. The antiserum was shown to be sensitive and specific for the detection of GLRaV-3 in grapevine extracts in Western blot and DAS-ELISA assays, with no unspecific or heterologous reactions against other non-serologically related viruses being observed.

Plantas de feijão-vagem do cultivar Novirex apresentando mosaico e enrolamento de vagens, sem deformação foliar evidente, foram coletadas em 2002 em Cordisburgo, MG. Estudos preliminares identificaram o vírus como um isolado do Bean rugose mosaic virus (BRMV). Este trabalho relata a caracterização do isolado, por meio de produção e avaliação de anti-soro, determinação da gama de hospedeiros, estudo da transmissão do vírus por besouros crisomelídeos e estimativa de perdas em feijoeiro como resultado de infecção isolada ou em conjunto com o Bean common mosaic virus (BCMV). O roteiro adotado para purificação possibilitou a obtenção de vírus purificado em rendimento satisfatório para a produção de anti-soro. A titulação dos anti-soros foi realizada por ELISA indireto, obtendo-se reações positivas com a diluição máxima testada (1:70.000). Das 22 espécies vegetais utilizadas na gama de hospedeiros, foram infectadas plantas de Chenopodium quinoa e alguns cultivares de feijão e soja, conforme esperado para o BRMV. O isolado de BRMV foi transmitido pelo besouro crisomelídeo Cerotoma arcuata a uma taxa de 33,3%. A infecção simples de feijão 'Ouro Negro' e de feijão-vagem 'Novirex' levou a uma redução do peso das vagens por planta de 3,4% e 84,9%, respectivamente. Infecção mista do BRMV com o BCMV levou a uma redução do peso de vagens por planta de até 70,1% para 'Novirex' e de até 90,8% para 'Ouro Negro'.

Bean plants of the cultivar Novirex, showing an atypical pod curling symptom without mosaic or leaf distortion, were collected in 2002 at Cordisburgo, MG. Previous studies identified the virus as an isolate of Bean rugose mosaic virus (BRMV). This work reports on the characterization of the isolate, including its purification and production of a polyclonal antiserum, determination of a partial host range, vector transmission, and an estimate of yield losses due to single or mixed infection with Bean common mosaic virus (BCMV). The protocol adopted for virus purification led to purified preparations with high yield, and the antisera obtained reacted with the maximum dilution tested (1:70.000) in indirect ELISA. From the 22 plant species tested as hosts, Chenopodium quinoa reacted with chlorotic local lesions, which evolved to mosaic and leaf distortion in non-inoculated leaves. Bean and soybean cultivars reacted with mosaic and leaf distortion of varying intensity, as expected for BRMV. The isolate was transmitted by Cerotoma arcuata to 33.3% of the inoculated plants. Single infection of 'Ouro Negro' and 'Novirex' beans caused a reduction in the total weight of pods per plant of 3.4% and 84.9%, respectively. Mixed infection with BCMV caused a reduction of pod weight per plant of up to 70.1% in 'Novirex' and up to 90.8% in 'Ouro Negro'.

A região Noroeste da Argentina (províncias de Tucumán, Salta, Jujuy, Santiago del Estero e Catamarca), de clima subtropical, apresenta uma alta incidência da mosca-branca Bemisia tabaci e a detecção de begomovírus também é freqüente. O Noroeste é a principal região produtora de feijão do país e produz aproximadamente 10% da soja da Argentina. A identidade e diversidade genética de begomovírus associados à soja e ao feijoeiro no Noroeste da Argentina foram estudadas com base na amplificação de fragmentos do genoma viral via PCR, utilizando oligonucleotídeos universais para o gênero Begomovirus que amplificam um fragmento correspondente à região 5' do gene da proteína capsidial. Os fragmentos amplificados foram clonados e seqüenciados, e as seqüências foram submetidas à análise filogenética. Os resultados indicam a presença de quatro espécies de begomovírus, todas relacionadas às espécies do Novo Mundo. O vírus prevalente, detectado em 94% das amostras de feijoeiro e soja e em duas amostras de plantas daninhas, apresentou alta identidade de sequência e relacionamento filogenético com o Sida mottle virus (SiMoV). Um vírus com alta identidade de seqüência com o Bean golden mosaic virus (BGMV) foi detectado em feijoeiro. As duas outras espécies apresentaram menos de 89% de identidade com os demais begomovírus, sugerindo-se tratar de novas espécies. Uma dessas possíveis novas espécies foi detectada em plantas de feijoeiro, soja e tomateiro.

The subtropical Northwestern region of Argentina (provinces of Tucumán, Salta, Jujuy, Santiago del Estero and Catamarca) suffers from a high incidence of the whitefly Bemisia tabaci, and the detection of begomoviruses is also common. The Northwest is the main bean-growing region of the country, and approximately 10% of Argentina's soybean crop is grown in this area. We have used a PCR-based assay to establish the identity and genetic diversity of begomoviruses associated with bean and soybean crops in Northwestern Argentina. Universal begomovirus primers were used to direct the amplification of a fragment encompassing the 5' portion of the capsid protein gene. Amplified fragments were cloned, sequenced and subjected to phylogenetic analysis to determine the sequence identity to known begomoviruses. The data indicated the presence of four distinct begomoviruses, all related to other New World begomoviruses. The prevalent virus, which was present in 94% of bean and soybean samples and also in two weed species, is closely related to Sida mottle virus (SiMoV). A virus with high sequence identity with Bean golden mosaic virus (BGMV) was found in beans. The two remaining viruses displayed less than 89% identity with other known begomoviruses, indicating that they may constitute novel species. One of these putative novel viruses was detected in bean, soybean and tomato samples.

Dezesseis plantas transgênicas (R0) de maracujá-amarelo (Passiflora spp.) foram obtidas expressando um RNA não-traduzível correspondente à região 3' do gene NIb e 5' do gene CP de um isolado brasileiro do CABMV. As plantas R0 foram propagadas vegetativamente por estaquia e inoculadas com os isolados CABMV-MG1 e CABMV-PE1. Uma das plantas (TE5-10) foi resistente ao isolado CABMV-MG1, porém suscetível ao isolado CABMV-PE1. As demais plantas transgênicas foram suscetíveis a ambos os isolados, apresentando sintomas sistêmicos semelhantes ao de plantas não-transformadas. A ausência de replicação viral nas plantas TE5-10 foi confirmada por ELISA indireto. A análise da transcrição do transgene nas plantas TE5-10 demonstrou que estas não acumulam o mRNA transgênico, mesmo antes da inoculação com o vírus. Após a inoculação, o RNA viral foi detectado apenas em plantas inoculadas com o isolado CABMV-PE1. Esses resultados confirmam que a planta TE5-10 é resistente ao isolado CABMV-MG1, e sugerem que o mecanismo da resistência é baseado em silenciamento gênico pós-transcricional, o qual já se encontra ativado nas plantas antes da inoculação com o vírus.

Sixteen transgenic yellow passionfruit (Passiflora spp.) plants (R0) were obtained which express a non-translatable transgenic RNA corresponding to the 3' region of the NIb gene and the 5' region of the CP gene, derived from the genome of a Brazilian isolate of Cowpea aphid-borne mosaic virus (CABMV). The transgenic plants were propagated by stem cuttings and challenged by sap inoculation with isolates CABMV-MG1 and CABMV-PE1. One transgenic plant (TE5-10) was resistant to the isolate CABMV-MG1, but susceptible to CABMV-PE1. The remaining transgenic plants developed systemic symptoms, equal to non-transformed plants, when inoculated with either isolate. The absence of virus in TE5-10 plants was confirmed by indirect ELISA. Transcription analysis of the transgene demonstrated that the TE5-10 plant did not accumulate transgenic mRNA, even before inoculation. After inoculation, viral RNA was only detected in plants inoculated with CABMV-PE1. These results confirm that the transgenic plant TE5-10 is resistant to isolate CABMV-MG1, and suggest that the resistance mechanism is post-transcriptional gene silencing, which is already activated in the transgenic plants before virus inoculation.

Amostras foliares de plantas de maracujá-amarelo (Passiflora edulis f. flavicarpa) com sintomas típicos de endurecimento dos frutos foram coletadas nos estados de Pernambuco, Paraíba e Sergipe. A infecção viral foi comprovada por meio de teste sorológico e gama de hospedeiros. Os seis isolados virais obtidos foram capazes de infetar várias espécies testadas, porém apresentando diferenças na intensidade dos sintomas induzidos nessas hospedeiras. Teste de ELISA indireto demonstrou que os isolados obtidos a partir de plantas de maracujá são sorologicamente relacionados entre si e com o potyvírus Cowpea aphid-borne mosaic virus (CABMV). A seqüência de aminoácidos da proteína capsidial foi determinada para os seis isolados. A comparação dessas seqüências com as de outros potyvírus indicou uma identidade máxima com isolados de CABMV (86 a 94%). A identidade com isolados de Passionfruit woodiness virus (PWV) foi de 68 a 76%. Análise filogenética realizada a partir das seqüências de aminoácidos agrupou os isolados em estudo junto a isolados de CABMV, distante de isolados de PWV. Em conjunto, os resultados indicam que os isolados de maracujá analisados constituem na verdade uma estirpe do CABMV.

Leaf samples of yellow passionfruit plants (Passiflora edulis f. flavicarpa) showing woodiness symptoms in the fruit were collected in fields located in the states of Pernambuco, Paraíba and Sergipe. Virus infection was confirmed by serology and inoculation of indicator plants. The six viral isolates obtained from passionfruit were capable of infecting several plant species, although a difference in the intensity of symptoms induced by each isolate was observed in some hosts. Indirect ELISA showed that the passionfruit isolates were serologically related to each other, and also to the potyvirus Cowpea aphid-borne mosaic virus (CABMV). The amino acid sequence of the capsid protein was determined for the six isolates. Sequence comparisons with other potyviruses indicated a maximum degree of identity with CABMV (86 to 94%). Sequence identity with isolates of Passionfruit woodiness virus (PWV) ranged from 68 to 76%. Phylogenetic analysis based on the amino acid sequences confirmed that the Brazilian passionfruit isolates are closely related to CABMV, and only distantly related to PWV. Together, these results indicate that the potyvirus isolates obtained from passionfruit comprise a strain of CABMV.

Vinte isolados virais provenientes de Capsicum spp. foram coletados em Minas Gerais, São Paulo, Espírito Santo e Rio de Janeiro visando definir a etiologia dos mosaicos. Para a caracterização biológica realizou-se teste de gama de hospedeiros e inoculação em cultivares diferenciadoras de pimentão (Capsicum annuum). Dois isolados provenientes de batata (Solanum tuberosum) (PVY N-BR e PVY O-BR) foram utilizados como controles. Os resultados indicaram considerável grau de variabilidade biológica entre os isolados, embora todos tenham sido identificados preliminarmente como Potato virus Y (PVY). A reação das cultivares diferenciadoras classificou os isolados como patótipo 1 ou 1.2 de PVY. Anti-soros foram produzidos a partir de partículas virais purificadas de um isolado fraco e um forte. O uso desses anti-soros em ELISA indireto levou a resultados positivos contra os isolados testados. Os anti-soros reagiram também contra PVY N-BR e PVY O-BR, embora este último tenha apresentado reação mais fraca. Para caracterização molecular, seqüenciaram-se os genes da polimerase (NIb) e da proteína capsidial (cp), e da região 3' não-traduzida (3'NTR) de isolados biologicamente distintos. A análise filogenética confirmou a identidade de seis isolados como Pepper yellow mosaic virus (PepYMV), um potyvírus descrito recentemente infetando pimentão no Brasil. Esse resultado sugere que o PepYMV pode ser a espécie de potyvírus predominante em Capsicum spp. no Brasil. O fato de isolados de PepYMV apresentarem gama de hospedeiros semelhante à do PVY, e de os dois vírus apresentarem relacionamento sorológico, ressalta a utilidade da análise molecular para a classificação de potyvírus provenientes de Capsicum spp.

Twenty isolates were obtained from Capsicum spp. plants in the states of Minas Gerais, São Paulo, Espírito Santo and Rio de Janeiro. The isolates were biologically characterized using a host range assay and inoculation into a series of differential sweetpepper (Capsicum annuum) cultivars. Two isolates from potato (Solanum tuberosum) (PVY N-BR e PVY O-BR) were used as controls. The isolates displayed a high degree of biological variability, although they were all preliminarly identified as Potato virus Y (PVY). The reaction in the differential cultivars enabled the classification of the isolates as pathotypes 1 or 1.2 of PVY. The production of antiserum was carried out using purified virions of one mild and one severe isolate. Using these antisera in indirect ELISA, positive reactions against all the isolates were observed. The antisera also reacted against PVY N-BR and PVY O-BR, although the latter reacted weakly. For molecular characterization, the polymerase (NIb) and capsid protein (cp) genes and the 3' non-translated region (3'NTR) of biologically distinct isolates were cloned and sequenced. Phylogenetic analysis confirmed the identity of six isolates as Pepper yellow mosaic virus (PepYMV), a potyvirus recently described infecting sweet pepper (Capsicum annuum) in Brazil. This result suggests that PepYMV could be the predominant potyvirus causing mosaic in Capsicum species in Brazil. Since PepYMV isolates have host ranges similar to PVY (including the reaction in differential cultivars), and the two viruses cross-react serologically, the usefulness of the molecular analysis is demonstrated in the identification of potyviruses from Capsicum spp.

Um anti-soro policlonal específico para Watermelon mosaic virus (WMV) foi produzido por meio da imunização de coelhos com proteína capsidial purificada, expressa in vitro em células de Escherichia coli. O gene cp foi amplificado via RT-PCR utilizando oligonucleotídeos específicos, a partir de RNA viral extraído de preparações virais concentradas. O fragmento amplificado foi clonado em pBLUESCRIPT KS+ e completamente seqüenciado para confirmação de sua identidade e integridade. Em seguida, o fragmento foi subclonado no vetor de expressão pRSET-A. Plasmídeos recombinantes foram utilizados para a expressão da proteína capsidial em E. coli BL21::DE3. A proteína foi purificada por meio de cromatografia de afinidade em coluna de Ni+-NTA, a partir de proteínas totais extraídas de E. coli. Uma vez purificada, a proteína foi quantificada e utilizada para imunização dos coelhos. O anti-soro foi testado quanto a sua especificidade e sensibilidade em testes de Western blot, DAS-ELISA, imunodifusão e ELISA indireto. Todos os testes demonstraram que o anti-soro produzido a partir da expressão in vitro da proteína capsidial é altamente específico para a detecção do WMV em extratos foliares, não tendo sido observada nenhuma reação heteróloga interespecífica.

A Watermelon mosaic virus (WMV)-specific, polyclonal antiserum was raised in rabbits by immunization with purified capsid protein expressed and purified from Escherichia coli cells. The cp gene was RT-PCR-amplified using specific oligonucleotides, and viral RNA extracted from concentrated particles as a template. The amplified fragment was cloned in pBLUESCRIPT KS+ and fully sequenced in order to confirm its identity and integrity. The fragment was subsequently subcloned into the pRSET-A expression vector. Recombinant plasmids were used to induce the expression of the capsid protein in E. coli BL21::DE3. The protein was purified by affinity chromatography using a Ni+-NTA resin, from E. coli total protein extract. The purified protein was quantified and used for the immunization of rabbits. The antiserum was tested for its sensitivity and specificity in Western blot, DAS-ELISA, immunodiffusion and indirect ELISA assays. All tests indicated that the antiserum raised from in vitro-expressed capsid protein is highly specific for the detection of WMV in plant extracts, with no interspecific, heterologous reactions being observed.

Levantamentos realizados no estado de São Paulo indicaram a ocorrência isolada e em infecções mistas do Lettuce mosaic virus (LMV) e do Lettuce mottle virus (LeMoV) em plantas de alface (Lactuca sativa). O presente trabalho teve como objetivo estudar os efeitos da infecção isolada e mista entre o LMV (patótipos II e IV) e o LeMoV, em cultivares de alface suscetível (White Boston) e tolerante (Elisa - gene mol¹) ao LMV patótipo II. As plantas foram inoculadas via extrato vegetal tamponado com isolados de LMV-II, LMV-IV e LeMoV separadamente e em diferentes combinações, com intervalo de 24 h ou simultaneamente com os dois vírus. As plantas infetadas foram analisadas utilizando-se hospedeiras diferenciais para o LMV e o LeMoV, e no caso do LMV pelo teste sorológico de PTA-ELISA. Nas avaliações de peso fresco e seco, área foliar e teor de clorofila, observou-se que a cultivar White Boston foi a mais afetada por ambos os vírus. As infecções mistas e isoladas na cultivar Elisa causaram efeitos semelhantes, provavelmente devido a presença do gene mo1¹ de tolerância ao LMV-II. O isolado LMV-IV foi considerado o mais agressivo nestas cultivares quando comparado ao LMV-II e o LeMoV.

A survey of virus isolates causing mosaic in lettuce (Lactuca sativa) in the state of São Paulo, Brazil, indicated the occurrence of Lettuce mosaic virus (LMV) and Lettuce mottle virus (LeMoV) alone or in mixed infections. The objective of this work was to study the effects of single and mixed infections between LMV (pathotypes II and IV) and LeMoV in susceptible (White Boston) and tolerant (Elisa, mo1¹ gene) lettuce cultivars. Plants were sap-inoculated with LMV-II, LMV-IV and LeMoV, in single infections and in different combinations, with either a 24 h interval between the two viruses or simultaneously. Plants were tested for the presence of LMV and LeMoV using differential hosts and, in the case of LMV, the serological test (PTA-ELISA) was used. In the evaluations of fresh and dry weight, leaf area and chlorophyll content, the White Boston cultivar was observed to be the most affected by both viruses. This cultivar's response to single and mixed infections was similar, probably due to the presence of the mo1¹ gene which confers tolerance to LMV-II. When compared to LMV-IV and LeMoV, LMV-IV was the most aggressive isolate.

A análise da variabilidade genética de geminivírus infetando tomateiros (Lycopersicon esculentum) na região Sudeste do Brasil foi realizada por meio do seqüenciamento direto de fragmentos de PCR amplificados com oligonucleotídeos universais para o componente A de begomovírus, seguido de análise filogenética. Amostras de tomateiro e de algumas plantas daninhas associadas, apresentando sintomas típicos de infecção por vírus, foram coletadas em sete municípios nos estados de Minas Gerais, Espírito Santo e Rio de Janeiro. Após extração de DNA total e PCR, verificou-se que 137 amostras estavam infetadas por begomovírus, de um total de 369 amostras coletadas. A análise filogenética indicou existir uma grande diversidade genética de begomovírus em tomateiros nas três regiões amostradas, com a predominância de uma espécie viral (Tomato chlorotic mottle virus, TCMV) na Zona Metalúrgica de MG, enquanto no RJ e ES predomina uma outra espécie não completamente caracterizada. A análise filogenética indicou ainda a presença de outras quatro possíveis novas espécies de begomovírus em tomateiro. O alto grau de diversidade genética encontrado sugere uma transferência recente de begomovirus a partir de hospedeiros silvestres para o tomateiro. O relacionamento filogenético encontrado entre os begomovirus de tomateiro e isolados virais obtidos a partir de plantas daninhas favorece essa hipótese.

The genetic diversity of begomovirus isolates from tomato (Lycopersicon esculentum) fields in the Southeastern region of Brazil was analyzed by direct sequencing of PCR fragments amplified by using universal oligonucleotides for the begomovirus DNA-A, and subsequent computer-aided phylogenetic analysis. Samples of tomato plants and associated weeds showing typical symptoms of virus infection were collected at seven locations in the states of Minas Gerais, Espírito Santo and Rio de Janeiro. A total of 137 out of 369 samples were infected with a begomovirus based on PCR analysis. Phylogenetic analysis indicated a high degree of genetic diversity among begomoviruses infecting tomatoes in the sampled area. One species (Tomato chlorotic mottle virus, TCMV) occurs predominantly in Minas Gerais, whereas in Rio de Janeiro and Espírito Santo a distinct species, not yet fully characterized, predominates. Phylogenetic analysis further indicates the presence of an additional four possible new species. This high degree of genetic diversity suggests a recent transfer of indigenous begomovirus from wild hosts into tomatoes. The close phylogenetic relationship verified between begomovirus infecting tomato and associated weeds favors this hypothesis.

O cubiu (Solanum sessiliflorum), originário da Amazônia, é um fruto utilizado como alimento, medicamento e cosmético. Em um plantio experimental de cubiu, para a avaliação da sua adaptação nas condições da região Norte do Estado do Rio de Janeiro, observou-se plantas com sintomas de mosaico. Uma planta de cubiu foi coletada e analisada para a identificação do agente etiológico. Após a purificação biológica, o vírus foi inoculado via extrato foliar em uma série de plantas diferenciadoras. Foram observadas lesões locais cloróticas em Chenopodium quinoa, lesões locais necróticas em Gomphrena globosa, mosaico em S. sessiliflorum, necrose foliar e de caule em tomate (Lycopersicon esculentum) 'Rutgers' e mosaico e deformação foliar em Datura stramonium e Physalis floridana. O vírus ocasionou lesões locais necróticas e necrose sistêmica seguida de morte de quatro espécies de Nicotiana. Em cortes ultra-finos de folhas de cubiu foram observadas partículas de formato circular envolvidas por membrana, típicas de tospovírus. A análise em SDS-PAGE da proteína do nucleocapsídeo concentrada a partir de folhas de cubiu revelou uma banda com aproximadamente 28 kDa, valor esperado para tospovírus. Um fragmento de aproximadamente 0,8 bp correspondente ao gene N (proteína do nucleocapsídeo) foi amplificado por RT-PCR, clonado e seqüenciado. Foi constatada homologia de seqüência de aminoácidos de 95% entre a proteína N do isolado do cubiu e de Groundnut ringspot virus (GRSV). Para as demais espécies a homologia foi inferior a 85%. Este é o primeiro relato da ocorrência natural do GRSV (ou qualquer outro vírus) em plantas de cubiu.

The cubiu (Solanum sessiliflorum) fruit, originating in the Amazon basin, is commonly used in that region for food, medicine, and cosmetics. In an experimental culture of cubiu, in order to evaluate its adaptation to conditions in the Northern region of the state of Rio de Janeiro, it was observed plants with mosaic symptoms. A cubiu plant was collected and analyzed to identify the etiological agent. After mechanical passage through a local lesion host, a host range test was performed. The virus induced chlorotic local lesions in Chenopodium quinoa, necrotic local lesions in Gomphrena globosa, mosaic in S. sessiliflorum, leaf and stem necrosis in tomato (Lycopersicon esculentum) 'Rutgers', mosaic and leaf distortion in Datura stramonium and Physalis floridana, and necrotic local lesions followed by systemic necrosis and plant death in four Nicotiana species. Electron microscopic observations of ultra thin sections from infected cubiu leaves showed the presence of spheroidal, membrane-bound particles typical of tospovirus species. Analysis of the nucleocapsid protein from concentrated virus particles indicated the presence of a 28 kDa protein. RT-PCR was performed after total RNA extraction from infected IPA-6 tomato leaves. A fragment of approximately 0,8 kbp corresponding to the N gene was amplified, cloned and sequenced. The N protein from the cubiu isolate was 95% homologous to the Groundnut ringspot virus (GRSV) protein, and no more than 85% homologous to those from Zucchini lethal chlorosis virus (ZLCV) and Chrysanthemun stem necrosis virus (CSNV), Tomato spotted wilt virus (TSWV), and Tomato chlorotic spot virus (TCSV). This is the first report of the occurrence of GRSV (or any other plant virus) in cubiu.